ಉತ್ಪನ್ನಗಳು

5-ಫ್ಲೋರೊರಾಸಿಲ್ (5-FU) ಮತ್ತು ಎರಡು ಅಂತರ್ವರ್ಧಕ ಮೊನೊಫಾಸ್ಫೇಟ್ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೊಟೈಡ್‌ಗಳ ಹಲವಾರು ಮೆಟಾಬಾಲೈಟ್‌ಗಳನ್ನು ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಾಗಿ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಿಸಲು, ನಾವು ಲಿಕ್ವಿಡ್ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿ-ಟಂಡೆಮ್ ಮಾಸ್ ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಮೆಟ್ರಿ (LC-MS/MS) ಆಧಾರದ ಮೇಲೆ ಮೂಲ ವಿಧಾನವನ್ನು ಅಭಿವೃದ್ಧಿಪಡಿಸಿದ್ದೇವೆ.ಈ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯು ನಿರ್ಧರಿಸಲು ಅವಕಾಶ ಮಾಡಿಕೊಟ್ಟಿತು: (i) 5-FU ಅಥವಾ 5-ಫ್ಲೋರೋ-2′-ಡಿಯೋಕ್ಸಿಯುರಿಡಿನ್ (5-FdUrd) ನಿಂದ 5-ಫ್ಲೋರೋ-2′-ಡಿಯೋಕ್ಸಿಯುರಿಡಿನ್-5′-ಮೊನೊಫಾಸ್ಫೇಟ್ (5-FdUMP) ನ ಅಂತರ್ಜೀವಕೋಶ ಉತ್ಪಾದನೆ , (ii) ಅಂತರ್ಜೀವಕೋಶದ 2′-ಡಿಯೋಕ್ಸಿಯುರಿಡಿನ್-5′-ಮೊನೊಫಾಸ್ಫೇಟ್ (dUMP)/ಥೈಮಿಡಿನ್-5′-ಮೊನೊಫಾಸ್ಫೇಟ್ (TMP) ಅನುಪಾತದ ಮೇಲೆ 5-FdUMP ಸಾಂದ್ರತೆಯ ಪ್ರಭಾವ, ಮತ್ತು (iii) 5-FdUMP ನ ಸ್ರವಿಸುವಿಕೆಯ ಪ್ರಮಾಣ ಮತ್ತು ಎಬಿಸಿ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಪೋರ್ಟರ್‌ಗಳಿಂದ ಮಾನವ ಕಲ್ಚರ್ಡ್ ಸೆಲ್‌ಗಳಿಂದ 5-ಎಫ್‌ಯು.ನಮ್ಮ ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ, ಕೋಶಗಳನ್ನು 5-FU ಅಥವಾ 5-FUrd ನೊಂದಿಗೆ ಕಾವುಕೊಡಲಾಗುತ್ತದೆ.ನಂತರ, ಸೆಲ್ಯುಲಾರ್ ಪ್ರೋಟೀನ್ಗಳು ಮೆಥನಾಲ್ನಿಂದ ಅವಕ್ಷೇಪಿಸಲ್ಪಟ್ಟವು.ಈ ವಿಧಾನವು ಹೆಚ್ಚಿನ ಹೊರತೆಗೆಯುವಿಕೆ ಚೇತರಿಕೆ ನೀಡಿತು.ಜೊತೆಗೆ, ಜೀವಕೋಶಗಳಿಂದ 5-FU ಮತ್ತು 5-FdUMP ಸ್ರವಿಸುವಿಕೆಯನ್ನು ಅಳೆಯಲು, ನಾವು ಸಂಸ್ಕೃತಿ ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ ಈ ಅಣುಗಳ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣವನ್ನು ನಡೆಸಿದ್ದೇವೆ.ಮಾಧ್ಯಮವನ್ನು ನೇರವಾಗಿ ಚುಚ್ಚಲಾಗುತ್ತದೆ (5-ಎಫ್‌ಯು) ಅಥವಾ ಓಯಸಿಸ್ ವ್ಯಾಕ್ಸ್ ಎಕ್ಸ್‌ಟ್ರಾಕ್ಷನ್ ಕಾರ್ಟ್ರಿಡ್ಜ್ (5-ಎಫ್‌ಡಿಯುಎಂಪಿ) ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಘನ ಹಂತದ ಹೊರತೆಗೆಯುವಿಕೆಗೆ ಒಳಪಟ್ಟಿದೆ.dC18 ಅಟ್ಲಾಂಟಿಸ್ 3.5 μm, (100 mm × 2.1 mm id) ಕಾಲಮ್‌ನಲ್ಲಿ ಅಮೋನಿಯಂ ಫಾರ್ಮೇಟ್ ಬಫರ್/ಮೆಥೆನಾಲ್/ವಾಟರ್ (5/5/90, v/v) ಅನ್ನು ಮೊಬೈಲ್ ಹಂತವಾಗಿ ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಐಸೊಕ್ರೆಟಿಕ್ ಮೋಡ್‌ನಲ್ಲಿ ವಿಶ್ಲೇಷಕಗಳ ಪ್ರತ್ಯೇಕತೆಯನ್ನು ನಡೆಸಲಾಯಿತು.ರನ್ ಸಮಯವು 6.2 ನಿಮಿಷಗಳನ್ನು ಮೀರಲಿಲ್ಲ.ಋಣಾತ್ಮಕ ಅಯಾನು ಕ್ರಮದಲ್ಲಿ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಸ್ಪ್ರೇ ಇಂಟರ್‌ಫೇಸ್‌ನಲ್ಲಿ ವಿಶ್ಲೇಷಕಗಳನ್ನು ಅಯಾನೀಕರಿಸಲಾಗಿದೆ.ಸಂಯುಕ್ತಗಳ ಪ್ರಕಾರ 2.5-150 ng mL -1 ವ್ಯಾಪ್ತಿಯಲ್ಲಿ ನಾವು ವಿಧಾನವನ್ನು ಮೌಲ್ಯೀಕರಿಸಿದ್ದೇವೆ.ಏಳು ದಿನಗಳಲ್ಲಿ ಇಂಟ್ರಾ ಮತ್ತು ಇಂಟರ್-ಅಸ್ಸೇ ವ್ಯತ್ಯಯವು 10% ಕ್ಕಿಂತ ಕಡಿಮೆಯಾಗಿದೆ.ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಕನಿಷ್ಠ ಎರಡು ವಾರಗಳವರೆಗೆ −20 °C ನಲ್ಲಿ ಸಂಗ್ರಹಿಸಿದಾಗ ಮತ್ತು ಮೂರು ಫ್ರೀಜ್-ಲೇಪ ಚಕ್ರಗಳ ನಂತರ ಎಲ್ಲಾ ಸಂಯುಕ್ತಗಳು ಜೀವಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ಅಥವಾ ಸಂಸ್ಕೃತಿ ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ ಸ್ಥಿರವಾಗಿರುತ್ತವೆ.ಎರಡೂ ಮಾಧ್ಯಮಗಳಲ್ಲಿ ಮ್ಯಾಟ್ರಿಕ್ಸ್ ಪರಿಣಾಮವನ್ನು ಗಮನಿಸಲಾಗಿಲ್ಲ.