ಉತ್ಪನ್ನಗಳು

ನಮ್ಮ ಹಿಂದಿನ ಅಧ್ಯಯನಗಳು KSHV ಸೋಂಕಿನ ಆರಂಭಿಕ ಮತ್ತು ಕೊನೆಯ ಹಂತಗಳಲ್ಲಿ ಅದರ ನಿರ್ಣಾಯಕ ಪಾತ್ರಗಳನ್ನು ಬಹಿರಂಗಪಡಿಸಿವೆ.ಈ ಅಧ್ಯಯನದಲ್ಲಿ, ನಾವು ಮೊನೊಕ್ಲೋನಲ್ ಪ್ರತಿಕಾಯಗಳ ಫಲಕವನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ORF45 ನ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಸಮೀಕ್ಷೆ ಮಾಡಿದ್ದೇವೆ.ಹಿಂದೆ ಗುರುತಿಸಲಾದ ಎಕ್ಸ್‌ಟ್ರಾಸೆಲ್ಯುಲರ್ ರೆಗ್ಯುಲೇಟೆಡ್ ಕೈನೇಸ್ (ERK) ಮತ್ತು p90 ರೈಬೋಸೋಮಲ್ S6 ಕೈನೇಸ್ (RSK) ಪ್ರೊಟೀನ್‌ಗಳ ಜೊತೆಗೆ, ನಾವು ∼38 kDa ಮತ್ತು ∼130 kDa ಯ ಪ್ರಮುಖವಾದವುಗಳನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಂತೆ ಹಲವಾರು ಇತರ ಸಂಯೋಜಿತ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳನ್ನು ಕಂಡುಕೊಂಡಿದ್ದೇವೆ.38-kDa ಪ್ರೋಟೀನ್ ವೈರಲ್ ORF33 ಮತ್ತು 130-kDa ಪ್ರೋಟೀನ್ ಸೆಲ್ಯುಲಾರ್ USP7 (ubiquitin-ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಪ್ರೋಟೀಸ್ 7) ಎಂದು ಮಾಸ್ ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಮೆಟ್ರಿ ಬಹಿರಂಗಪಡಿಸಿತು.ನಾವು ORF33-ಬೈಂಡಿಂಗ್ ಡೊಮೇನ್ ಅನ್ನು ORF45 ನ ಹೆಚ್ಚು ಸಂರಕ್ಷಿತ ಕಾರ್ಬಾಕ್ಸಿಲ್-ಟರ್ಮಿನಲ್ 19 ಅಮೈನೋ ಆಮ್ಲಗಳಿಗೆ (aa) ಮತ್ತು USP7-ಬೈಂಡಿಂಗ್ ಡೊಮೇನ್ ಅನ್ನು ORF45 ನ ಕೇಂದ್ರ ಪ್ರದೇಶದಲ್ಲಿ ವರದಿ ಮಾಡಲಾದ ಒಮ್ಮತದ ಮೋಟಿಫ್‌ಗೆ ಮ್ಯಾಪ್ ಮಾಡಿದ್ದೇವೆ.ಇಮ್ಯುನೊಫ್ಲೋರೊಸೆನ್ಸ್ ಸ್ಟೈನಿಂಗ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು, ವರ್ಗಾವಣೆಗೊಂಡ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ ಮತ್ತು KSHV-ಸೋಂಕಿತ ಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ORF33 ಅಥವಾ USP7 ನೊಂದಿಗೆ ORF45 ನ ಕೊಲೊಕಲೈಸೇಶನ್ ಅನ್ನು ನಾವು ಗಮನಿಸಿದ್ದೇವೆ.ಇದಲ್ಲದೆ, ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಸ್‌ನಿಂದ t he ಸೈಟೋಪ್ಲಾಸಂಗೆ ORF33/USP7 ನ ಭಾಗದ ORF45-ಅವಲಂಬಿತ ಮರುಸ್ಥಳೀಕರಣವನ್ನು ನಾವು ಗಮನಿಸಿದ್ದೇವೆ.ORF45 ನಲ್ಲಿ ORF33- ಅಥವಾ USP7-ಬೈಂಡಿಂಗ್ ಡೊಮೇನ್ ಅನ್ನು ಅಳಿಸಿದರೆ ORF33 ಪ್ರೊಟೀನ್ ಸಂಗ್ರಹಣೆಯಲ್ಲಿ ORF45 ಹೆಚ್ಚಳಕ್ಕೆ ಕಾರಣವಾಯಿತು ಎಂದು ನಾವು ಕಂಡುಕೊಂಡಿದ್ದೇವೆ.ಇದಲ್ಲದೆ, KSHV ಜೀನೋಮ್‌ನಲ್ಲಿನ ORF45 ರ ಸಂರಕ್ಷಿತ ಕಾರ್ಬಾಕ್ಸಿಲ್ ಟರ್ಮಿನಸ್ ಅನ್ನು ಅಳಿಸುವುದು KSHV-ಸೋಂಕಿತ ಜೀವಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ORF33 ಪ್ರೋಟೀನ್‌ನ ಮಟ್ಟವನ್ನು ತೀವ್ರವಾಗಿ ಕಡಿಮೆಗೊಳಿಸಿತು ಮತ್ತು ಸಂತಾನ ವೈರಿಯನ್‌ಗಳ ಉತ್ಪಾದನೆಯನ್ನು ರದ್ದುಗೊಳಿಸಿತು.ಒಟ್ಟಾರೆಯಾಗಿ, ನಮ್ಮ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು ORF45 ಸಂವಾದದ ಹೊಸ ಘಟಕಗಳನ್ನು ಮಾತ್ರ ಬಹಿರಂಗಪಡಿಸುವುದಿಲ್ಲ, ಆದರೆ ಈ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳ ನಡುವಿನ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಗಳು KSHV ಲೈಟಿಕ್ ಪುನರಾವರ್ತನೆಗೆ ನಿರ್ಣಾಯಕವಾಗಿದೆ ಎಂದು ತೋರಿಸುತ್ತದೆ. ಕಪೋಸಿಯ ಸಾರ್ಕೋಮಾ-ಸಂಬಂಧಿತ ಹರ್ಪಿಸ್ವೈರಸ್ (KSHV) ಹಲವಾರು ಮಾನವ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್‌ಗಳಿಗೆ ಕಾರಣವಾಗುವ ಅಂಶವಾಗಿದೆ.KSHV ORF45 ಎಂಬುದು KSHV ಲೈಟಿಕ್ ಪುನರಾವರ್ತನೆಗೆ ಅಗತ್ಯವಿರುವ ಬಹುಕ್ರಿಯಾತ್ಮಕ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಆಗಿದೆ, ಆದರೆ ORF45 ಅದರ ನಿರ್ಣಾಯಕ ಕಾರ್ಯಗಳನ್ನು ನಿರ್ವಹಿಸುವ ನಿಖರವಾದ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನಗಳು ಅಸ್ಪಷ್ಟವಾಗಿದೆ.ನಮ್ಮ ಹಿಂದಿನ ಅಧ್ಯಯನಗಳು ಜೀವಕೋಶಗಳಲ್ಲಿನ ಎಲ್ಲಾ ORF45 ಪ್ರೋಟೀನ್ಗಳು ಹೆಚ್ಚಿನ ಆಣ್ವಿಕ-ತೂಕದ ಸಂಕೀರ್ಣಗಳಲ್ಲಿ ಅಸ್ತಿತ್ವದಲ್ಲಿದೆ ಎಂದು ಬಹಿರಂಗಪಡಿಸಿತು.ಆದ್ದರಿಂದ ನಾವು ಲೈಟಿಕ್ ಪುನರಾವರ್ತನೆಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಅದರ ಪಾತ್ರಗಳ ಬಗ್ಗೆ ಒಳನೋಟಗಳನ್ನು ಒದಗಿಸಲು ORF45 ನ ಸಂವಾದಾತ್ಮಕತೆಯನ್ನು ನಿರೂಪಿಸಲು ಪ್ರಯತ್ನಿಸಿದ್ದೇವೆ.ಮೊನೊಕ್ಲೋನಲ್ ಪ್ರತಿಕಾಯಗಳ ಫಲಕವನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು, ನಾವು KSHV- ಸೋಂಕಿತ ಜೀವಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ORF45 ಸಂವಾದಾತ್ಮಕತೆಯನ್ನು ಸಮೀಕ್ಷೆ ಮಾಡಿದ್ದೇವೆ.ನಾವು ORF45 ನ ಎರಡು ಹೊಸ ಬೈಂಡಿಂಗ್ ಪಾಲುದಾರರನ್ನು ಗುರುತಿಸಿದ್ದೇವೆ: ವೈರಲ್ ಪ್ರೋಟೀನ್ ORF33 ಮತ್ತು ಸೆಲ್ಯುಲರ್ ಯುಬಿಕ್ವಿಟಿನ್-ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಪ್ರೋಟೀಸ್ 7 (USP7).KSHV ವೈರಲ್ ಕಣಗಳ ಸಮರ್ಥ ಉತ್ಪಾದನೆಗೆ ORF45 ಮತ್ತು ORF33 ನಡುವಿನ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಯು ನಿರ್ಣಾಯಕವಾಗಿದೆ ಎಂದು ನಾವು ಮತ್ತಷ್ಟು ಪ್ರದರ್ಶಿಸುತ್ತೇವೆ, ಈ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಯೊಂದಿಗೆ ಉದ್ದೇಶಿತ ಹಸ್ತಕ್ಷೇಪವು KSHV ಲೈಟಿಕ್ ಪುನರಾವರ್ತನೆಯನ್ನು ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸುವ ಹೊಸ ತಂತ್ರವನ್ನು ಪ್ರತಿನಿಧಿಸಬಹುದು ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ.